ハリネズミホコリタケ Vesse-de-loup hérisson ヒタチノスナジホコリタケ

Lycoperdon ericaeum Bonord. 1857 Botanische Zeitung 15: 596
Vesse-de-loup hérisson, ハリネズミホコリタケ

• Basidiomycota / Gasteromycetes / Lycoperdales / Lycoperdaceae

• Synonyme :  Lycoperdon muscorum Morgan, Journal of the Cincinnati Society of Natural History 12: 17 (1889)

• Exopéridium

• Couleur : Blanc, Brun, Crème

• Gléba

• Couleur : Blanc, Brun, Crème

• Références bibliographiques Sarasini Gasteromiceti epigei p. 196 ;

Photo Jean-Louis Cheype, Prairie acide au lac des Bouillouses à 2000m (Pyrénées orientales), le 23/9/2008. Dét. Serge Poumarat.

Kasuya T, Uno K, Hosaka K, 2013. Additional records of Lycoperdon ericaeum (Basidiomycota, Agaricaceae) from Ibaraki Prefecture, Japan, with notes on its phylogenetic placement. Bulletin of Ibaraki Nature Museum, 16: 43-49. (in Japanese)

Additional Records of Lycoperdon ericaeum （ Basidiomycota, Agaricaceae ） from Ibaraki Prefecture, Japan

茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケの追加記録とその系統的位置43

はじめに

担子菌門ハラタケ科ホコリタケ属に属するきのこの一種，ヒタチノスナジホコリタケ Lycoperdon ericaeum Bonord. はヨーロッパ，北アメリカおよび日本に分布する（糟谷，2011）． 日本においては，茨城県那珂郡東海村および稲敷市の針葉樹林内の砂地上で採集され，糟谷（2011）が日本新産種として報告したが，それ以降の報告例はな い． 筆者らは，茨城県ひたちなか市内の海岸砂地の針葉樹林内において，新たにヒタチノスナジホコリタケの子実体発生を確認したのでここに報告する．

ところで，ヒタチノスナジホコリタケを含むホコリタケ属菌については，これまでに詳細な分子系統学的研究が行われている（Larsson and Jeppson，2008; Jeppson et al .，2012）． ホコリタケ属内におけるヒタチノスナジホコリタケの系統的位置もすでに明らかとなっているが（Larsson and Jeppson，2008），日本産標本茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケ（担子菌門，ハラタケ科）の追加記録およびその系統的位置糟谷大河＊・宇 野邦彦＊＊・保坂健太郎＊＊（2013 年 9 月 26 日受理）

Abstract

A lycoperdaceous fungus, Lycoperdon ericaeum was collected in a coastal pine forest of Hitachinaka, Ibaraki Prefecture, Japan. This is the second report of L. ericaeum in Japan. To reveal the phylogenetic position of Japanese specimens of L. ericaeum , molecular phylogenetic analyses of the present fungus were conducted. By maximum parsimony analyses of nuclear rRNA ITS region, materials of L. ericaeum collected from Japan（Ibaraki）and Europe（Sweden）were placed within the same well-supported clade. The present analyses revealed that Japanese and European specimens of L. ericaeum are monophyletic, identical taxon.

Key words: Ibaraki Prefecture, lycoperdaceous fungus, Lycoperdon ericaeum , phylogénétique moléculaire, taxinomie.

* 千葉科学大学危機管理学部環境危機管理学科 〒 288-0025 千葉県銚子市潮見町 3 番地（Department of Environmental System Science, Faculty of Risk and Crisis Management, Chiba Institute of Science, 3 Shiomi-cho, Choshi, Chiba 288-0025, Japan）．

** 国立科学博物館植物研究部 〒 305-0005 茨城県つくば市天久保 4-1-1（National Museum of Nature and Science, 4-1-1 Amakubo, Tsukuba, Ibaraki 305-0005, Japan）．茨城県自然博物館研究報告 Bull. Ibaraki Nat. Mus., （16）:43-49（2013）

糟谷大河・宇野邦彦・保坂健太郎 44を用いた分子系統解析は行われておらず，日本産標本の系統的位置は明確になっていなかった． そこで筆者らは，今回採集したヒタチノスナジホコリタケの標本を用いて分子系統解析を試みた． 本報告ではその系統的位置についても考察する．

材料および方法

1． 子実体の採集および標本作製筆者の一人，糟谷は 2011 年 10 月 21 日および同年11 月 6 日に，茨城県ひたちなか市馬渡，国営ひたち

海浜公園内のアカマツ Pinus densiflora Siebold et Zucc. およびクロマツ Pinus thunbergii Parl. からなる針葉樹林内（図 1A）において，複数のホコリタケ型きのこ類の子実体を発見した（図 1B-D）． 採集した子実体は写真撮影の後，肉眼的特徴を記録した． これらの形態的特徴は，糟谷（2011）による記載とよく一致していたことから，筆者らはこれらをヒタチノスナジホコリタケと同定した．

子 実体は，食品用乾燥機（Snackmaster Express FD-61，Nesco/American Harvest，WI，USA）を用いて 46℃で 36 時間熱乾燥させ，乾燥標本を作製した． 乾燥標本に加えて，Hosaka and Castellano（2008），Hosaka et al .（2010），Kasuya et al .（2012）の方法に従い，新鮮な子実体から剃刀の刃を用いてグレバ（基本体）の一部を切り取り，100 mM Tris-HCl（pH 8.0）および 0.1M 亜硫酸ナトリウム（Na2SO3）を添加した DMSO バッファー（Seutin et al .，1991）中に浸漬し，4℃で保

図 1． ヒタチノスナジホコリタケの発生環境および子実体． A: 発生環境． B: 剥落しやすい顆粒状突起からなる外皮に覆われた，未熟な子実体（INM-2-71749）． C: 円錐形で先端部が癒合した外皮に覆われる，成熟した子実体（INM-2-71760）． D:帯黄色の内皮に覆われる，成熟した子実体（INM-2-71760）．

Fig. 1. Habitat and basidiomata of Lycoperdon ericaeum . A: Habitat of L. ericaeum . B: Immature basidiomata showing exoperidium with pulverulent granules（INM-2-71749）.C: A mature basidioma showing exoperidium with conical, convergent spines（INM-2-71760）.D: Mature basidiomata showing yellowish endoperidium （INM-2-71760）.

茨城県におけるヒタチノスナジホコリタケの追加記録とその系統的位置45存した． なお，供試標本はミュージアムパーク茨城県

自然博物館（INM）に保管した（表 1）．供試標本 : 茨城県ひたちなか市馬渡，国営ひたち海浜公園，海岸の針葉樹林内砂地上，2011 年 10 月 21 日，

糟谷大河採集，INM-2-71749; 同所，2011 年 11 月 6 日，糟谷大河採集，INM-2-71760．

2． 子実体の形態観察

子 実体の肉眼的特徴は，新鮮な生の子実体に基づき観察した． 光学顕微鏡観察には，基本体の切片を作成し，それらを水，3%（w/v）KOH 水溶液，または 1%ラクトフェノール・コットンブルー溶液を用いて観察した． 担子胞子の大きさは光学顕微鏡の 1,000 倍の倍率下で無作為に抽出した 40 個を用いて測定した．

3． DNA 抽出，PCR およびシークエンシング採集した子実体からの DNA 抽出は，DMSO バッファー中に浸漬した試料を用いて行った． また，比較のためにミュージアムパーク茨城県自然博物館（INM）および国立科学博物館（TNS）に収蔵されている，茨城・石川両県産のヒタチノスナジホコリタケ以外のホコリタケ型きのこ類の標本（表 1）からも DNA 抽出を行った． DNA 抽出は，グラスミルクを用いた改変 CTAB 抽出法（Hosaka，2009; Hosaka and Castellano，2008; 糟谷ほか，2013）によった． すなわち，試料を乳鉢に入れた後，液体窒素を加えながら乳棒を用いて攪拌し，CTAB バッファーを加えた． その後，65℃で1 時間加温し，たんぱく質を除去するため，クロロホルムとイソアミルアルコールの 24: 1 の混合液を加えた． 試料にはさらに，6 M ヨウ化ナトリウムバッファー（Hosaka and Castellano，2008）を加えて DNA を抽出した後，グラスミルクを添加して DNA を吸着させ，エタノール／バッファー溶液で洗浄した． 抽出したDNA は 100 µl の TE バッファー中で保存した．

以上により得られた DNA を鋳型とし，PCR により核 rRNA 遺伝子の転写領域内部スペーサー（ITS）領域を増幅した． ITS 領域の増幅には ITS1f と ITS4（Gardes and Bruns，1993）のプライマーセットをそれ ぞれ用いた． PCR は，反応液を 20 µl［1 µl の精製DNA，1 µl の dNTP（4 mM），1 µl の各プライマー（8µM），0.5 units の Taq ポリメラーゼ（Takara），2 µl のMgCl2（25 mM），2 µl の Bovine Serum Albumin（BSA）］とし，以下の温度プログラムにより行った：前処理，94℃ 3 分を 1 サイクル；熱変性，94℃ 35 秒，アニーリング，51℃ 30 秒，伸長，72℃ 1 分を 30 サイクル；後処理，72℃ 10 分を 1 サイクル．

PCR 産物は 1% アガロースゲルで電気泳動した後，エチジウムブロマイドにより染色させ，紫外線照射により可視化させた． これにより遺伝子の増幅が確認された場合，PCR 産物を illustra ExoStar（GE Healthcare，UK）を用いて精製し，Big Dye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit（Applied Biosystems Inc.，Norwalk，CT，USA）により定法に従ってダイレクトシークエンスを行い，塩基配列を決定した． 以上により得られた 6 点のホコリタケ型きのこ類の塩基配列を，国際的な遺伝情報データベースである GenBank（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/）に登録した（表 1）．

Revista Catalana de Micologia, vol. 23: 47-50; 2001.                                 47

 AN INTERESTING LYCOPERDON AFFIN TO L. ERICAEUM

M. P. MARTÍN (1) & M. JEPPSON (2)

1.- Real Jardín Botànico, C.S.LC., Plaza de Murillo 2,280 14 Madrid, Spain .

2.- Lilla H àjumsgatan 4, S-461 35 Trollhattan, Sweden .

ABSTRACT. An interesting Lycoperdon affin to L. ericaeum. Lycoperdon collections recorded from acidic, dry, mossy habitats on rocks or on sand in Fennoscandia and the Northeastem of Spain are here described. These collections are close to L. ericaeum but differs in its protruding ostiole and its subelastic capilitium.

Key Word s: Basidiomycotina , Lycoperdales, Spain , Sweden

RESUMEN. Un interesante Lycoperdon afín a L. ericaeum. Se han recolectado basidiomas de Lycoperdon entre musgos en terrenos acidófilos or en zonas arenosas en Fennoscandia y en el noreste de España. Estas recolecciones presentan caracteres similares a los de L. ericaeum, pero difieren en su ostíolo prominente y el capilicio subelàstico.

INTRODUCTION

In the early 1970-ies an unidentified species of Lycoperdon with small subglobose to pyriform fruitbodies growing in thin moss cover on granitic rocks was discovered in South Sweden. The same species was later found also in South Norway, Finland and Northeastem of the Iberian Peninsula. Recently, these specimens were reexamined to define the macroscopic and microscopic characters following the criteria of DEMOULIN (1972). The material studied is kept mainly in MA-Fungi , BCC and the private herbarium of M. Jeppson (Ml). Observations of the gleba were made using a Hitachi S-2300 SEM according to MARTIN & ROCABRUNA (1988). It is an interesting Lycoperdon related to L. ericaeum and, according to V. Demoulin , could be a form of L. niveum, a rare species of which the variability is unfortunately not sufficiently known at the moment.

DESCRIPTION

Basidiomes subglobose-pyriform (0,7)-1,0-1,5-2 cm in diameter. Exoperidium whitish, pale brownish or yellowish brown, formed by flocculent and convergent small spines (less than 1 mm tall); some collections, with brown and isolated small spines. Endoperidium yellowish brown. Mouth rounded , lobed, distinctly protruding. Subgleba small but usually well developed , pale greyish brown. Pseudocolumella weakly developed. Spore print yellowish brown, "terre d'ombre brûlée" (PXII n° 176; SEGUY, 1936).

Exoperidium formed by thinwalled and hyaline sphaerocysts, 10-20 um in diameter; sometimes irregular, somewhat angular sphaerocysts have been observed. Endoperidium "banal" formed by hyphae running paralell to the surface; these hyphae are 6-7 um in diameter; in mouth zone isolated, dextrinoid and spiny setate sphaerocysts are present (20-60 x 4-8 urn). Capillium subelastic and fragile, hyphae (2-5 um diameter) frequently ramified, thinwalled with some small pores; septa occur sparingly, often at the ramifications. Spores sphaerical 4,0-4,5-(5,0) µm diameter, finely warted (B); no debris of broken pedicels have been observed.

HABITAT AND DISTRIBUTION.    Found in general in more or less sun-exposed dry, acidic places among mosses on rocks, at margins of mixed forest (Fennoscandia and Spain) as well as among mosses and low herbs on dry sand in hemiboreal and boreal zones in Fennoscandia.

COLLECTIONS EXAMINED. NORWAY: Oppland, NordreLand, Nord sinni , Mellersforsen , 31-8-1997, leg. 1. & M. Jepp son 4304 (M l , MA-Fungi); Sedre Land , Trevattna, N. Vassenden, 14-9- 1984 , leg. 1. Nitare (Ml 1673). SPAIN: Barcelona, Vallès Oriental, Mosqueroles, 2-12 -1992, leg. A. Rocabruna (BCC- MPMI606). SWEDEN: Vastergotland, R àngedala, N of lake Marsjon , 1-11-1996, leg. R.-G. Carl sson (Ml); Va stergot land , Trollhattan, Sylte , 2-9-1971 , leg . M. Jepp son 57 (Ml); Ibidem , 30-4 -1970, leg. M. Jepp son 170 (Ml); Ibidem , 19-8-1972, leg. M . Jepp son 248 (Ml, MA -Fungi ); Idem , leg. M. Jepp son 250 (Ml); Idem , leg. M. Jepp son 251 (Ml , ); Ibidem, 5-9-1972, leg. M. Jepp son 258 (Ml , BCC, MA- Fungi ); Va stergotland, V. Tunhem, S of "Hernbygdsgàrden, 7-9-1974, leg. M . Jepp son 540 (M l , BCC, MA -Fungi ); Ibidem , 12-10-1974, leg. M. Jepp son 629 (Ml); Vasterbotten, Stad sliden, Gammlia, 10-9-1979, leg. 1. Nitare (S) .

The subelasticum capillitium and the protruding mouth with thickwalled, dextrinoid, setose sphaerocysts, are not present in L. ericaeaum Bonorden. L. niveum is an artic-alpine species so far known from the Himalayas and Iceland. The spore omamentation is the best character that separate this species (typus C, DEMüULIN 1972) from the material described in this paper (typus B, DEMüULIN 1972).

ACKNOWLEDGMENTS To Prof. V. Demoulin for useful comments during the ellaboration ofthis paper.

REFERENCES

DEMOULIN, V. (1972 ). Le genre Lycoperdon en Europe et en Amérique du Nord . Étude taxonomique et Phytogéographique. Doctoral Thesis. Univ, Liège .

MARTÍN, M.P. & ROCABRUNA, A. (1988 ).Phellorinia herculeana (pallas: Pers.) Kreisel en los Monegros.

SÉGUY, E. (1936). XXX Code Universel des couleurs. Edt. P. Lechevalier, 51 pI. Paris

Fig. 1 Lycoperdon sp. aff. L. ericaeum Bonorden.- A. Habitus. B. Detail of peridium. C. Capillitium. D. Spores. E. Setose sphaerocysts from mouth zone.

Fig . 2. Lycoperdon sp . aff. L. ericaeum Bonorden. Spore s (A, C, D, F) and capillitium (B, E). Collections BCC - MPM 1606 (A, B), M. Jeppson 258 (C, O) and M. Jeppson 540 (E, F).